CLEC12B un gène de la famille des lectines impliqué dans le processus de melanomagénèse en agissant comme un gène suppresseur de tumeurs : CLEC12B un gène suppresseur de tumeurs impliqué dans le mélanome
Institution:
Université Côte d'Azur (ComUE)Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
Despite significant progress in recent years, melanoma remains among the most aggressive and deadly human cancers. Thus, it still remains essential to explore the molecular and cellular mechanisms involved in the melanomagenesis process in order to discover new therapeutic options. A transcriptomic analysis from vitiligo patient skins allowed us to discover that the C-lectin receptor CLEC12B (C-type lectin domain family 12-member B) is selectively and strongly expressed by melanocytes. The objective of this study was to investigate the role of CLEC12B in melanoma. We first showed that the expression of CLEC12B is lower in melanoma cell lines, and in melanoma cells extracted from patient metastases, compared to the expression in normal human melanocytes. Immunohistochemical analysis further showed a lower expression of CLEC12B, in human melanoma samples (primary and metastatic melanomas from patients) compared to melanocytic nevi. Using the TCGA database, we found that patients with high CLEC12B expression have a significantly higher median survival than those with low expression. Taken together, these first results suggested a potential role of CLEC12B in melanomagenesis process. Subsequently, using a lentivirus construct, we overexpressed (Ov-CLEC12B) and downregulated (Sh-CLEC12B) CLEC12B in human melanoma cells lines, and we demonstrated that CLEC12B inhibits the proliferation and colony formation, through activation of p53/p21/p27 and the inhibition of STAT pathway. We demonstrated, using a co-immunoprecipitation assay, and after generating a mutant of CLEC12B ITIM domain, that CLEC12B function is mediated by its ITM domain, which directly recruits and activates the tyrosine phosphatase SHP-2. Once activated by CLEC12B, SHP-2 inactivates the STAT pathway, as observed with a decrease of STAT1, STAT3 and STAT5 phosphorylated forms and promotes p53/p21/p27 pathway activation with a slow down in G0-G1 phase of cell cycle. Opposite effects were observed after silencing CLEC12B. Finally, tumorigenic properties of CLEC12B were analyzed in nude mice with tumor xenograft experiments. In accordance with in vitro results, the tumor growth in Ov CLEC12B group was significantly decreased compared to vehicle group and was associated with a decreased expression of pSTAT3 and an increase of p53 within the tumors. The opposite was noted with Sh CLEC12B. This study reveals CLEC12B as a novel potent suppressor gene in melanoma by regulating cell cycle and repressing STAT activation.
Abstract FR:
Malgré les progrès thérapeutiques importants accomplis ces dernières années, le mélanome garde un pronostic péjoratif au stade métastatique. Il est donc essentiel d’explorer les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans le processus de mélanomagénèse dans la perspective de découvrir de nouvelles cibles thérapeutiques.Une analyse transcriptomique comparative de la peau de patients atteints de vitiligo (et donc dénuée de mélanocytes) par rapport à de la peau non lésionnelle et la peau de sujets témoins, nous a permis de découvrir que le récepteur de la lectine C, CLEC12B (C-type lectin domain family 12-member B) était sélectivement et fortement exprimé par les mélanocytes. L'objectif de cette étude était d'étudier le rôle de CLEC12B in vitro et in vivo dans le mélanome. Nous avons d’abord montré que l’expression des transcrits de CLEC12B, par technique RT-PCR, était plus faible dans les lignées cellulaires de mélanome et dans les cellules de mélanome extraites de métastases de patients que dans les mélanocytes humains normaux. D’autre part, l'analyse protéique par immunohistochimie a montré une expression plus faible de CLEC12B, dans des échantillons de mélanome humain (mélanomes primaires et métastatiques de patients) par rapport aux nævi. La base de données TCGA, a révélé que les patients avec une expression élevée de CLEC12B avaient une survie médiane significativement supérieure à ceux avec une expression faible. Ces premiers résultats suggèrent un rôle potentiel de CLEC12B dans le processus de mélanomagénèse. Dans un second temps, en utilisant une construction de lentivirus, nous avons surexprimé (Ov-CLEC12B) et régulé négativement (Sh-CLEC12B) CLEC12B dans deux lignées cellulaires de mélanome humain (A375 BRAF muté et MeWo BRAF sauvage). Ainsi nous avons démontré que Ov-CLEC12B inhibait la prolifération et la formation de colonies, par l’activation de p53/p21/p27 et l’inhibition des STATs et notamment STAT3 qui est constitutivement activé dans le mélanome. Par ailleurs, par une expérience de co-immunoprécipitation et après avoir généré un mutant de CLEC12B sur son domaine ITIM, nous avons montré que CLEC12B par son domaine ITIM, recrute et active directement la tyrosine phosphatase SHP-2. Une fois activée par CLEC12B, SHP-2 inactive la voie STAT (diminution des formes phosphorylées de STAT1, 3 et 5) et augmente l’expression de p53/p21/p27 entrainant un ralentissement du cycle cellulaire en phase G0-G1. Des effets opposés sont observés après l’extinction de CLEC12B. Enfin, les propriétés tumorigèniques de CLEC12B ont été étudiées chez des souris nude avec des expériences de xénogreffe de tumeur (injection de la lignée A375 Ov et Sh-CLEC12B). En accord avec les résultats in vitro, la croissance tumorale dans le groupe Ov-CLEC12B était significativement réduite par rapport au groupe véhicule et était associée à une diminution de l'expression de pSTAT3 et à une augmentation de p53 dans les tumeurs. Le contraire a été observé dans les conditions Sh-CLEC12B.Au total, ce travail révèle que CLEC12B est un nouveau gène suppresseur du mélanome qui agit en régulant le cycle cellulaire et en réprimant l'activation de STAT.