Immunomodulation post allogreffe de moelle osseuse par l'approche gène suicide : analyse transcriptomique des lymphocytes T CD8+ produits ex vivo par voie rétrovirale et analyse cellulaire et moléculaire des cellules génétiquement modifiées après circulation in vivo chez des patients
Institution:
BesançonDisciplines:
Directors:
Abstract EN:
We performed a phase I/II clinical trial of Herpes-Simplex thymidine kinase (HS-tk) expressing gene-modified T cell (GMTC) infusion at time of bone marrow transplantation (BMT). Ex-vivo, we have previously shown that our GMTC production method (CD3 activation / NeoR selection) entails phenotypical and functional alterations, limited by an experimental protocol process (CD3-CD28 activation / ΔNGFR-MACS selection). Ln vivo, among 12 patients included, 4 are still alive more than 9 years after BMT. Circulating GMTC-NeoR+ is > to GMTC-HS-tk+, suggesting HS-tk transgene deletions. The present study aims : 1/ at providing a picture of the gene profile signature of GMTC, which may be infused into patients, in different conditions of production ; and 2/ at identifying and characterize the HS-tk alterations. - Our results revealed that : 1/ experimental protocol is less deleterious and should be used in immunotherapy ; and 2/ the whole HS-tk deletion occurs during the ex-vivo production process.
Abstract FR:
Nous avons réalisé un essai clinique de phase I/II en infusant des lymphocytes T génétiquement modifiés (CGM) exprimant le gène Herpes-Simplex thymidine kinase (HS-tk) lors d'une greffe de moelle. Ex-vivo, nous avons montré que notre méthode de production de CGM (CD3 activation/NéoR sélection) induit des anomalies phénotypiques et fonctionnelles, limitées en suivant un protocole expérimental (CD3-CD28 activation / ΔNGFR-MACS sélection). Ln vivo, parmi les 12 patients inclus, 4 sont en vie plus de 9 ans post-greffe. Les CGM circulantes NéoR+ sont > aux HS-tk+, suggérant des délétions du gène HS-tk. Cette étude a pour but : 1/ d'obtenir, dans différentes conditions de cultures, la signature transcriptomique des CGM destinées aux patients ; et 2/ d'identifier et caractériser les altérations du gène HS-tk. - Nos résultats montrent que : 1/ le protocole expérimental est moins délétère et pourrait être utilisé en immunothérapie ; et 2/ la délétion du gène HS-tk a lieu ex-vivo lors de la production des CGM.