Établissement de nouvelles lignées murines myogéniques, en vur de l'étude in vitro des régulations coordonnées des voies métaboliques et contractiles
Institution:
Paris 12Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
Our objective is to elucidate of factors involved in coordinated regulations of metabolic and contractile pathways of myofibres. We have established myogenic clones derived from satellite cells of the transgenic immortomouse. 1- We have analysed metabolic and contractile markers of clones derived from slow-oxidative and fast-glycolytic adult muscles as well as from newborn muscles. Our data suggest that, only satellite cells from slow muscles are predetermined, yielding differentiated myofribes of a slow phenotype. The WTT clone, derived from newborn muscles will differentiate into a mixed phenotype. This WTT clone was chosen to direct its mixed phenotype towards a more homogeneous slow OR fast phenotype. 2- To reach a slow phenotype, we have selected stably infected WTT clones overexpressing the PPARδ transcription factor involved in the control of oxidative energy metabolism. PPARδ overexpression appears to enhance slow phenotype of the WTT clone. 3- To reach a fast phenotype, we tried to stabilize the HIF-1α protein of WTT cells by using cobalt chloride (CoCl2). Hypoxia will induce stabilisation of HIF-1α, a key regulator involved in response to hypoxic signals. HIF-1α activate enzymes of the glycolytic pathway. 24h treatment favour the accumulation of fast MHC. 96h treatment induces a decrease in expression of the slow phenotypic markers. These results strongly suggest that HIF-1α might regulate fast and slow myofibre phenotypes through independent pathways. Our results suggest that these new myogenic clones will be useful to determine precise molecular mechanisms, implicating PPARδ and HIF-1α in coordinated metabolic and contractile regulations of striated myofribes.
Abstract FR:
Notre objectif est d'élucider les facteurs impliqués dans les régulations coordonnées métaboliques et contractiles des fibres musculaires. Nous avons établi des clones myogéniques dérivés de cellules satellites de souris immortomouse. 1- Nous avons analysé l'expression d'enzymes métaboliques et de protéines contractiles (MHC) de clones issus de muscles de souris adultes, lents-oxydatifs et rapides-glycolytiques et de muscles néonataux. Nos données suggèrent que, seules les cellules issues de muscles lents seraient prédéterminés. Le clone WTT, dérivé de muscles néonataux se différencie avec un phénotype mixte. WTT a été choisi pour tenter de diriger la différenciation vers un phénotype lent ou rapide. 2- Pour atteindre un phénotype lent, nous avons sélectionné des clones WTT surexprimant le facteur de transcription PPARδ de façon stable. Ce facteur est impliqué dans le contrôle du métabolisme oxydatif. La surexpression de PPARδ semble favoriser le phénotype lent du clone WTT. 3- Pour atteindre un phénotype rapide, nous avons tenté de stabiliser la protéine HIF-1α de WTT, en utilisant le chlorure de cobalt (CoCl2). L'hypoxie induit une stabilisation de HIF-1α qui active notamment des enzymes glycolytiques. Un traitement de 24h semble favoriser l'accumulation des MHCrapides. Un traitement de 96h induit une diminution du phénotype lent. Ces résultats suggèrent que HIF-1α régule les phénotypes lent et rapide des myofibres par des voies indépendantes. Ces lignées seront des outils précieux pour analyser les mécanismes moléculaires impliquant PPARδ et HIF-1α dans les régulations coordonnées métaboliques et contractiles, caractéristiques des fibres musculaires striées.