Abstract FR:

L'electrophorese de zone en ecoulement continu est une technique separative performante pour produire des molecules tres pures a l'echelle de quelques mg/h. Dans ce procede, les differentes especes sont separees sous l'effet d'un champ electrique au sein d'une veine liquide en ecoulement. Ces conditions particulierement douces, (absence de support solide), sont tout a fait adaptees a la purification de molecules fragiles. Au cours de la separation, differents phenomenes de transport sont mis en jeu qui s'opposent a l'effet separatif, lie a la difference de mobilite electrophoretique entre les produits. Une approche theorique simplifiee est donc proposee pour determiner l'importance relative de 2 phenomenes majeurs, l'effet croissant et l'electrohydrodynamique, en fonction des parametres physico-chimiques et operatoires. Cette etude des phenomenes limitants permet par exemple de determiner s'il existe, pour un produit de proprietes connues des conditions conduisant a une separation totale. L'interet de cette analyse est ensuite illustree sur deux exemples. Le premier concerne la separation de 2 proteines du lactoserum bovin, la lactoferrine et l'albumine, presentant des interactions pouvant dans certains cas donner lieu a la formation d'un complexe. L'etude du comportement electrophoretique du melange a permi de realiser soit une separation totale des deux proteines soit d'isoler la forme complexe. La methodologie ainsi mise en place a ete appliquee a la purification d'un anticorps monoclonal a partir d'un liquide ascite brut de souris. Dans les meilleures conditions jusqu'a 5 mg/h d'anticorps ont ete produits avec une purete egale a 95% en une seule etape de purification