Abstract FR:

L'antithrombine III (at) est l'inhibiteur majeur des sérine-protéases, principalement le facteur x active (fxa) et la thrombine. Son activité inhibitrice est catalysée par l'héparine et ses dérivés. Dans cette thèse, nous avons étudié la relation structure-fonction de cette glycoprotéine à l'aide de trois variants naturels d'at, de type II hbs, et d'anticorps monoclonaux (acm). Dans un premier temps, la mise au point d'un procédé de purification suivi d'une analyse biochimique des protéines mutées a permis de mettre en évidence le rôle structural et fonctionnel joué par le résidu arginine129 dans la molécule d'at. En effet, son remplacement par une glutamine semblerait affecter la structure spatiale de l'at, qui acquiert ainsi une plus grande stabilité thermique. L'activité inhibitrice du variant arg129gln n'est pas potentialisée par le pentasaccharide (ps) ; l'arg129 jouerait donc un rôle dans l'interaction at-ps. La seconde partie de ce travail caractérise l'interaction thrombine-at par le biais de trois acm murins diriges contre le complexe at humaine-ps. Les résultats obtenus, par des techniques d'immunoblotting et d'elisa, nous ont permis : 1) de confirmer la contribution de la région c-terminale de l'at dans l'expression de son activité inhibitrice et 2) de proposer une région de l'at, différente de la boucle du site réactif et de la partie c-terminale, impliquée dans la reconnaissance de l'inhibiteur par son enzyme. Un masquage de cette région anéantit l'activité inhibitrice de l'at et empêche la formation du complexe stable inactif thrombine-at.