Production d'anticorps monoclonaux dirigés contre des peptides de 3, 4 et 6 acides aminés identifiés dans le sérum humain : essai de mise au point d'un dosage immunologique du peptide HWESAS
Institution:
Nancy 1Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
Human plasma contains low molecwar weight growth factors potentiating certain in vitro biological effects of insulin-like growth factors. Recently three peptides were identified with HWESAS, HWE and WGHE as respective structures. Although it is difficult to product monoclonal antibodies directed against peptides characterized by a structure consisting of an amino acid number below 8, this study describes the production of such antibodies for peptides having 6, 4, or 3 residus. The mice immunizations were performed with homologous synthetic peptides coupled to a maleimide activated keyhole limpet hemocyanin and the hybridomas were prepared by standard techniques. By using an inhibition test, the specificity of monoclonal antibodies was deterrninated : they cross-reacted with original peptides as well as derivated peptides only when C terminus was not modified. Concerning the affinity, measured by non competitive enzyme immunoassay, the values range from 0,89 to 3,89 108 M-1. In addition, an ELISA was developped with antibodies directed against HWESAS to measure the serie concentration of this peptide in humans. The levels of peptide observed in healthy subjects were about 2µg/ml, they were dramatically decreased in chronic renal failure but norrnalized after a successful renal transplantation. These findings suggest that the kidney may play an important role in the production and/or metabolism of this hexapeptide. Such monoclonal antibodies will be useful tools for elucidation of low molecular weight growth factor production leading to a better understanding of their physiological and pathological significances.
Abstract FR:
Le plasma humain contient des facteurs de croissance peptidiques de petit poids moléculaire potentialisant in vitro certaines actions biologiques des insulin-like growth factors. Récemment, trois de ces peptides, ayant comme structure HWESAS, HWE et WGHE, ont été caractérisés et purifiés. L'obtention d'anticorps monoclonaux à l'aide de peptides de courte séquence est difficile. Le présent travail présente la production d'anticorps monoclonaux à l'aide de ces peptides comportant 6, 4 et 3 résidus seulement. Après immunisation de souris par des peptides homologues de synthèse couplés à une hémocyanine maléimidée, les hybridomes sont préparés selon les techniques classiques. Les anticorps monoclonaux obtenus sont caractérisés. Leur spécificité, déterminée par des tests d'inhibition, montre qu'ils reconnaissent les peptides originels et des peptides dérivés à condition que l'extrémité C terminale ne soit pas modifiée. Leurs constantes d'affinité, sont comprises entre 0,89 et 3,89 108 M-1. Du fait d'une impossibilité de marquage de ces peptides par l'125 I, l'anticorps dirigé contre HWESAS sert à mettre au point un dosage immunoenzymatique préliminaire qui permet de déterminer, chez des sujets sains, des concentrations de ce peptide de l'ordre de 2µg/ml. Ce taux est significativement diminué dans l'insuffisance rénale chronique pour redevenir normal après une transplantation rénale réussie. Ces résultats suggèrent que le rein pourrait jouer un rôle important dans la production et/ou le métabolisme de cet hexapeptide. L'obtention de ces anticorps monoclonaux ouvre des perspectives pour une meilleure compréhension de l'origine et des modes d'action de ces facteurs de croissance de petit poids moléculaire.